boyama - Staining
Boyama , numunelerde genellikle mikroskobik düzeyde kontrastı artırmak için kullanılan bir tekniktir . Lekeler ve boyalar sıkça kullanılan histoloji (biyolojik dokuların mikroskobik çalışma) ve tıbbi alanlarında histopatoloji , hematoloji ve sitopatolojisine o çalışma ve odaklanma tanı ve hastalığın mikroskopik düzeyde. Lekeler biyolojik dokuları (örneğin kas liflerini veya bağ dokusunu vurgulayarak ), hücre popülasyonlarını (farklı kan hücrelerini sınıflandırmak ) veya tek tek hücreler içindeki organelleri tanımlamak için kullanılabilir .
Gelen biyokimya bir sınıf-spesifik (eklemeyi içerir , DNA , proteinler , lipidler , karbohidratlar ) alma ya da belirli bir bileşiğin varlığını ölçmek için bir alt-tabaka için boya. Boyama ve floresan etiketleme benzer amaçlara hizmet edebilir. Biyolojik boyama aynı zamanda işareti hücreleri için kullanılan akış sitometrisi , ve bayrak için proteinler ya da nükleik asitler de jel elektroforezi . Işık mikroskopları, tipik olarak parlak alan veya epi-floresan aydınlatma kullanarak lekeli örnekleri yüksek büyütmede görüntülemek için kullanılır.
Boyama biyolojik materyallerle sınırlı değildir, aynı zamanda örneğin yarı kristal polimerlerin katmanlı yapıları veya blok kopolimerlerin alan yapıları gibi diğer materyallerin yapısını incelemek için de kullanılabilir .
In vivo vs In vitro
In vivo boyama ( hayati boyama veya intravital boyama olarakda adlandırılır), canlı dokuları boyama işlemidir. Belirli hücrelerin veya yapıların zıt renkler almasına neden olarak,bir hücre veya doku içindekiformları ( morfolojileri ) veya konumları kolayca görülebilir ve incelenebilir. Genel amaç, aksi halde görünür olmayabilecek sitolojik ayrıntıları ortaya çıkarmaktır; ancak boyama, hücreler veya dokular içinde belirli kimyasalların veya belirli kimyasal reaksiyonların nerede gerçekleştiğini de ortaya çıkarabilir.
In vitro boyama, biyolojik bağlamlarından çıkarılmış hücreleri veya yapıları renklendirmeyi içerir. Belirli lekeler genellikle tek bir lekeden daha fazla ayrıntı ve özellik ortaya çıkarmak için birleştirilir. Fiksasyon ve numune hazırlamaiçin özel protokollerle birliktebilim adamları ve doktorlar bu standart teknikleri tutarlı, tekrarlanabilir teşhis araçları olarak kullanabilirler. Bir karşı leke, ana leke ile tamamen görünür olmadığında hücreleri veya yapıları daha görünür hale getiren lekedir.
- Kristal menekşe hem Gram pozitif hem de Gram negatif organizmaları boyar. Alkolle muamele kristal menekşe rengini sadece gram negatif organizmalardan uzaklaştırır. Safranin karşı boya olarak alkolle rengi açılan gram negatif organizmaları renklendirmek için kullanılır.
Ex vivo iken, birçok hücre "sabitlenene" kadar yaşamaya ve metabolize olmaya devam eder. Bazı boyama yöntemleri bu özelliğe dayanmaktadır. Canlı hücreler tarafından dışlanan ancak zaten ölü hücreler tarafından alınan bu lekelere hayati lekeler denir (örneğin , ökaryotik hücreler için tripan mavisi veya propidium iyodür ). Canlı hücrelere giren ve bunları boyayanlara supravital boyalar denir (örneğin , retikülosit boyaması için Yeni Metilen Mavisi ve parlak kresil mavisi ). Bununla birlikte, bu lekeler sonunda organizma için toksiktir, bazıları diğerlerinden daha fazladır. Kısmen canlı bir hücre içindeki toksik etkileşimleri nedeniyle, supravital lekeler canlı bir hücreye girdiğinde, halihazırda sabitlenmiş bir hücrenin boyanmasından farklı karakteristik bir boyama modeli üretebilirler (örneğin, "retikülosit" görünümüne karşı yaygın "polikromazi"). İstenen etkileri elde etmek için, lekeler arasında değişen, çok seyreltik çözeltilerde kullanılan 1 : 5 000 bulundunuz 1 : 500 000 (Howey, 2000). Hem canlı hem de sabit hücrelerde birçok lekenin kullanılabileceğini unutmayın.
Hazırlık
İlgili hazırlık adımları, planlanan analizin türüne bağlıdır; aşağıdaki prosedürlerin bazıları veya tümü gerekli olabilir.
Islak Bağlar- ıslak bağlar canlı organizmaları görüntülemek için kullanılır ve su ve belirli lekeler kullanılarak yapılabilir. Organizma eklenmeden önce sıvı lam üzerine eklenir ve su ve leke içinde numunenin üzerine bir lamel yerleştirilir ve numunenin görüş alanı içinde tutulmasına yardımcı olur .
Kendi başına birkaç adımdan oluşabilen fiksasyon , ilgili hücrelerin veya dokunun şeklini mümkün olduğunca korumayı amaçlar. Bazen ısı fiksasyonu numuneyi öldürmek, yapıştırmak ve lekeleri kabul edecek şekilde değiştirmek için kullanılır. Çoğu kimyasal fiksatif (fiksasyona neden olan kimyasallar), proteinler ve numune içindeki diğer maddelerarasındakatılıklarını artırarak kimyasal bağlar oluşturur. Yaygın fiksatifler arasında formaldehit , etanol , metanol ve/veya pikrik asit bulunur . Doku parçaları,mekanik mukavemetlerini ve stabilitelerini artırmak ve ince dilimler halinde kesilmelerini kolaylaştırmak için parafin mumuna gömülebilir.
Mordan: Bunlar, aksi takdirde boyanamayan malzemeleri lekelemek için boya yapma gücüne sahip kimyasal maddelerdir.
Mordanlar iki kategoriye ayrılır:
a) Bazik Mordan: Şap, demir sülfat, setilpiridinyum klorür gibi asidik boyalarla reaksiyona girer.
b) Asidik Mordan : Pikrik asit, tannik asit vb. gibi bazik boyalarla reaksiyona girer.
Direkt Boyama: Mordansız gerçekleştirilir.
Dolaylı Boyama: Bir mordan yardımıyla yapılan boyama.
Bay No. | Dolaylı Boyama Tekniğinin Adı | Uygulanan mordanın adı |
---|---|---|
1.) | Gram boyama | gram iyot |
2.) | Hücre Duvarı Boyama
a.) Ringer yöntemi b.)Dyar'ın yöntemi |
%10 Tanik asit
%0,34 TBM |
3.) | Flagella Boyama
a.) Leifson'ın yöntemi b.) Loeffler'in yöntemi |
Leifson lekesinde tanik asit
Loeffler mordanı (%20 Tannik asit ) |
4.) | Spiroket Boyama
a.) Fontana'nın yöntemi b.) Becker'in yöntemi |
Fontana'nın mordanı (%5 Tannik asit)
Fontana'nın mordanı (%5 Tannik asit) |
Geçirgenleştirme , hücrelerin (genellikle) hafif bir yüzey aktif madde ile işlenmesini içerir . Bu işlem hücre zarlarını çözer ve daha büyük boya moleküllerinin hücrenin içine girmesine izin verir.
Montaj genellikle numunelerin gözlem ve analiz için bir cam mikroskop lamına bağlanmasını içerir. Bazı durumlarda, hücreler doğrudan bir slayt üzerinde büyütülebilir. Gevşek hücre örnekleri için (kan yayması veya pap smear'de olduğu gibi ) numune doğrudan bir slayta uygulanabilir. Daha büyük doku parçaları için, bir mikrotom kullanılarak ince kesitler (dilimler) yapılır; bu dilimler daha sonra monte edilebilir ve incelenebilir.
Standardizasyon
Mikroskopide yaygın olarak kullanılan boyaların çoğu, BSC sertifikalı boyalar olarak mevcuttur . Bu, üreticinin partisinden alınan numunelerin bağımsız bir kuruluş olan Biyolojik Leke Komisyonu ( BSC ) tarafından test edildiği ve belirli saflık, boya içeriği ve boyama tekniklerindeki performans standartlarını karşıladığının veya aştığının tespit edildiği ve deneylerin daha doğru bir şekilde gerçekleştirildiğini ve daha güvenilir olduğu anlamına gelir. Sonuçlar. Bu standartlar, Komisyonun Biotechnic & Histochemistry dergisinde yayınlanmaktadır . Birçok boya, bir tedarikçiden diğerine bileşim açısından tutarsızdır. BSC sertifikalı boyaların kullanılması, beklenmeyen sonuçların kaynağını ortadan kaldırır.
Bazı satıcılar, Biyolojik Leke Komisyonu tarafından değil, kendileri tarafından "onaylanmış" lekeleri satarlar. Bu tür ürünler, teşhis ve diğer uygulamalar için uygun olabilir veya olmayabilir.
negatif boyama
Bile, genellikle başarılı bakteriler için basit bir boyama yöntemi pozitif boyanma yöntemleri başarısız bir kullanmaktır negatif leke . Bu, numuneyi slayt üzerine bulaştırarak ve ardından nigrosin (siyah sentetik bir boya) veya Hindistan mürekkebi (sulu bir karbon parçacıkları süspansiyonu ) uygulayarak başarılabilir . Kurutulduktan sonra, mikroorganizmalar, parlak alan mikroskobunda, kendilerini çevreleyen karanlık ortamla iyi kontrast oluşturan daha açık inklüzyonlar olarak görülebilir. Negatif boyama, organizmalar yerine arka planı boyayabilir çünkü mikroorganizmaların hücre duvarı tipik olarak negatif yüklü boyayı iten bir negatif yüke sahiptir. Negatif boyamada kullanılan boyalar asidiktir. Not: Negatif boyama, mikroorganizmaları yok etmeyebilecek hafif bir tekniktir ve bu nedenle patojenleri incelemek için uygun değildir.
pozitif boyama
Negatif boyamadan farklı olarak, pozitif boyama, numuneyi parlak bir arka plana karşı renklendirmek için temel boyaları kullanır. Da kromofor negatif ve hem pozitif boyanma her ikisi için de kullanılır, bu teknikte kullanılan kromofor türü pozitif yüklü bir iyon negatif yerine biridir. Birçok mikroorganizmanın negatif yüklü hücre duvarı, numunenin lekeyi emmesine neden olan ve kullanılan lekenin rengini veren pozitif yüklü kromoforu çeker. Pozitif boyama, mikrobiyolojide negatif boyamadan daha yaygın olarak kullanılır. Farklı pozitif boyama türleri aşağıda listelenmiştir.
Basit Boyamaya karşı Diferansiyel Boyama
Basit Boyama, bir slaytta aynı anda yalnızca bir tür leke kullanan bir tekniktir. Yalnızca bir leke kullanıldığından, numuneler (pozitif lekeler için) veya arka plan (negatif lekeler için) tek renk olacaktır. Bu nedenle, basit lekeler tipik olarak slayt başına yalnızca bir organizmayı görüntülemek için kullanılır. Diferansiyel boyama, slayt başına birden fazla leke kullanır. Kullanılan lekelere bağlı olarak, farklı özelliklere sahip organizmalar, birden fazla numunenin kategorize edilmesine izin verecek şekilde farklı renklerde görünecektir. Diferansiyel boyama, endospor boyamasında görülebilen bir organizma içindeki farklı organelleri renklendirmek için de kullanılabilir .
Boyama Teknikleri Türleri
Bay Hayır. | Boyama Tekniği | Hazırlık | Başvuru | Sonuç |
---|---|---|---|---|
1. | Basit (Tek renkli) | Tek boya ile leke sürün.
Örneğin. Metilen mavisi, Safranin vb. |
Mikropları vurgulamak ve hücreyi göstermek için kullanılır
şekiller ve düzenlemeler. |
Organizmalar uygulanan lekenin renginde lekelenir |
2. | Negatif (Kabartma) | Nigrosin ile karıştırılmış ve yayılmış smear
ince filme |
Çalışma hücre morfolojisi | Organizma lekeli, arka plan siyah |
3 | Gram | Birincil leke: Filme uygulanan kristal menekşe, daha sonra iyot (mordan), alkol (renk giderici) ile işleme tabi tutulur ve safranin ile karşı lekelenir | Bakterileri Gram pozitif veya Gram negatif olmak üzere iki gruptan birinde karakterize eder | Gram pozitif mor renkte görünür
Gram negatif pembe renkte görünüyor |
4 | Asit hızlı (Ziehl-Neelsen tekniği) | Sıcak ZNCF decolorized (asit-alkol) ile boyanmış film ve metilen mavisi ile karşıt boya | Renklendirilmemiş asit hızlı bakterilerden renk giderilmemiş, rengi giderilmemiş asit hızlı bakterileri ayırın | Asit hızlı bakteri:Kırmızı
Asitsiz hızlı: Mavi |
5 | Endospor (Dornor yöntemi) | Sporlara nüfuz etmek için sabitlenmiş birincil leke Malakit yeşili ısı; vejetatif hücreler Safranin ile zıt boyanır | Altı bakteri türünde endospor varlığını tespit eder | Endosporlar: Yeşil
Bitkisel hücreler: Kırmızı |
6 | Kapsül
A: Hiss yöntemi (Pozitif teknik) B: Manevals'ın tekniği (Negatif) |
Bakır sülfat ile muamele sonrası Hiss boyası ile lekelenen yayma
Kongo kırmızısı ile birlikte bakteriyel süspansiyon bulaşmış ve Maneval'ın boyası uygulanmış |
Kapsüller, kapsüllü bakteri hücrelerini çevreleyen berrak bölgeler olarak gözlemlenebilir ve kapsüllerin varlığını göstermek için kullanılır. | Kapsül: Açık menekşe/soluk leylak rengi
Bakteriler: Mor kapsül, bakteri hücresi, Koyu arka plana karşı öne çıkıyor |
7 | Hücre duvarı (Dyar'ın yöntemi) | Pozitif yüklü setil piridinyum ve negatif yüklü klorür iyonları oluşturmak üzere ayrışan CPC ile tedavi edilen yayma. Pozitif yüklü iyonlar, negatif yüklü hücre duvarında adsorbe edilir. | Bakteri hücre duvarını lekeler | Hücre duvarı: Kırmızı Sitoplazma: Mavi |
8 | Flagella (Leifson'ın yöntemi) | Mordan, lekelenmeden önce kamçıyı kalınlaştırır ve Leifson boyası ile boyandığında mikroskobik olarak görünürlüğü artırır | Flagella varlığını gösterir | Flagella: Kırmızı Bitkisel hücreler: Mavi |
9 | Nükleer malzeme (Feulgen tekniği) | Yayma, DNA'dan pürinleri serbest bırakmak için hidroliz için işlenir, pürinler ise furanozdan aldehite kaymaya neden olur. Aldehit grupları, ilave bileşikler oluşturmak için schiff reaktifi ile reaksiyona girmek üzere mevcuttur. | Hücrede DNA'nın varlığını göstermek. Ancak DNA'nın tespiti için RNA, DNA'yı etkilemeden asit hidrolizi ile seçici olarak yok edilmelidir. | Nükleer malzeme- pembemsi mor,
sitoplazma- renksiz |
10 | Metakromatik granüller (Alberts yöntemi) | Yayma, yağları uzaklaştırmak için önce kloroform ile işlenir. Toluidin mavisi ve malakit yeşili gibi katyonik boyalar içeren Alberts boyası ile uygulanan smear. Toluidin mavisi tercihen granülleri boyarken malakit yeşili sitoplazmayı boyar. | Granüller tipik monokromatizma doğasını gösterir, bu granülleri göstermek için kullanılır | Granüller: Mavimsi siyah, Sitoplazma: Yeşil |
11 | Hücre içi lipidler (Burdon yöntemi) | Lipitler, Sudan siyahı gibi yağda çözünen boyalarla boyanır. Sudan uygulandığında siyah-B boyaları lipitlere geçer ve orada tutulurken sitoplazma safranin ile zıt boyanır. | Hücre duvarında, hücre zarında veya yağ globüllerinde lipitlerin varlığını tespit etmek (sitoplazmada PHB) | Lipid granülleri: Derin mavi,
Sitoplazma: Açık pembe |
12 | Polisakkarit (Hotch kuss yöntemi) | Polisakkarit, Schiff reaktifleri ile kırmızı renge reaksiyona giren polialdehit oluşturmak üzere periyodat ile oksitlenir, sitoplazma ise malakit yeşili ile zıt boyanır. | Hücrelerde polisakkarit granüllerinin birikimini tespit eder | Polisakkarit: Kırmızı
sitoplazma: Yeşil |
özel teknikler
Gram boyama
Gram boyama , bakteriyi hücre duvarlarının bileşimine göre genel olarak sınıflandırmak için gram durumunu belirlemek için kullanılır . Gram boyama, hücre duvarlarını boyamak için kristal menekşe , iyot (mordan olarak) ve bir fuksin veya safranin karşı lekesi (tüm bakterileri işaretleyin) kullanır. Gram durumu, bakteri örneklerinin genellikle altta yatan filogenilerini temsil eden iki gruba bölünmesine yardımcı olur. Bu özellik, diğer tekniklerle birlikte, uygun antibiyotiklerin erken seçiminde önemli olabileceği klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarında yararlı bir araç haline getirir .
Gram-boyalı preparatların çoğunda, Gram-negatif organizmalar, karşı boyamaları nedeniyle kırmızı veya pembe görünür. Daha yüksek lipid içeriğinin varlığından dolayı, alkol ile muameleden sonra hücre duvarının gözenekliliği artar, dolayısıyla CVI kompleksi (kristal menekşe – iyot) geçebilir. Böylece, birincil leke tutulmaz. Ek olarak, çoğu Gram pozitif bakterinin aksine, Gram negatif bakteriler sadece birkaç peptidoglikan tabakasına ve esas olarak lipopolisakaritten yapılmış ikincil bir hücre zarına sahiptir.
endospor boyama
Endospor boyama , bakterileri öldürmeyi çok zorlaştıran endosporların varlığını veya yokluğunu belirlemek için kullanılır . Bakteriyel sporların, sulu boya reaktiflerine karşı geçirgen olmadıkları için lekelenmelerinin zor olduğu kanıtlanmıştır. Endospor boyama, Clostridium difficile gibi endospor oluşturan bakteriyel patojenlerin tanımlanması için özellikle yararlıdır . Daha verimli yöntemlerin geliştirilmesinden önce, bu boyama, Wirtz yöntemi kullanılarak ısı ile sabitleme ve karşı boyama ile gerçekleştiriliyordu. Malakit yeşili ve seyreltilmiş karbol fuksin oranı kullanılarak, bakterilerin ozmik asit içinde sabitlenmesi, boyaların karışmamasını sağlamanın harika bir yoluydu. Ancak yeni revize edilen boyama yöntemleri, bu lekelerin oluşması için gereken süreyi önemli ölçüde azaltmıştır. Bu revizyon, yeni seyreltilmiş %5 malakit yeşili formülü ile eşleştirilmiş sulu Safranin ile karbol fuksin ikamesini içeriyordu. Bu yeni ve geliştirilmiş leke bileşimi, daha sonraki incelemeler için ısıyla sabitleme, durulama ve kuru kurutma kullanılarak öncekiyle aynı şekilde gerçekleştirildi. İnceleme üzerine, tüm endospor oluşturan bakteriler, kırmızı görünen diğer tüm hücrelerle birlikte yeşile boyanacaktır.
Ziehl-Neelsen lekesi
Bir Ziehl-Neelsen leke leke türleri için kullanılan bir asit hızlı bir leke olan Mycobacterium tuberculosis gibi Gram boyama gibi standart laboratuar boyama işlemleri ile leke yoktur.
Bu leke, hem bakterileri boyayan kırmızı renkli karbol fuksin hem de metilen mavisi gibi bir karşı leke kullanılarak gerçekleştirilir .
Hematoksilen ve eozin (H&E) boyaması
Hematoksilen ve eozin boyama , histolojide ince doku kesitlerini incelemek için sıklıkla kullanılır . Hematoksilin hücre çekirdeğini mavi boyarken , eozin sitoplazmayı, bağ dokusunu ve diğer hücre dışı maddeleri pembe veya kırmızıya boyar. Eozin, kırmızı kan hücreleri tarafından güçlü bir şekilde emilir ve onları parlak kırmızıya boyar. Ustalıkla hazırlanmış bir H&E preparasyonunda kırmızı kan hücreleri neredeyse turuncu renktedir ve kollajen ve sitoplazma (özellikle kas) farklı pembe tonları kazanır.
Papanicolaou boyama
Papanicolaou boyama veya PAP boyama, kaliteden ödün vermeden boyama sürelerini ve maliyeti azaltma umuduyla ince iğne aspirasyon sitolojisinin (FNAC) yerini almak üzere geliştirilmiştir. Bu boyama, çeşitli organlardaki çeşitli doku tiplerinden alınan hücre örneklerini incelemek için sıklıkla kullanılan bir yöntemdir. PAP boyama, FNAC için “uygun bir alternatif” haline gelmek için çeşitli modifikasyonlara maruz kalmıştır. Bu geçiş, havayla kurutulmuş Romanowsky yaymalarının opak görünümüne karşı çekirdek yapılarını koruyan bilim adamları tarafından ıslak sabit yaymaların takdir edilmesinden kaynaklandı. Bu, ultra hızlı papanicolaou boyası olarak bilinen ıslak sabitlenmiş ve havayla kurutulmuş hibrit bir lekenin yaratılmasına yol açtı. Bu modifikasyon, hücre şeffaflığını artırmak için hücreleri yeniden sulandırmak için nazal tuzlu su kullanımını içerir ve çekirdeklerin renklerini geliştirmek için alkollü formalin kullanımı ile eşleştirilir. Papanicolaou boyası, morfolojik kalitedeki artışı, boyama süresinin azalması ve maliyetin azalması nedeniyle artık tüm organ tiplerinde sitolojik boyama yerine kullanılmaktadır. Pap smear örneklerini boyamak için sıklıkla kullanılır . Hematoksilin , Turuncu G , eozin Y , Açık Yeşil SF sarımsı ve bazen Bismarck Brown Y kombinasyonunu kullanır .
PAS boyama
Periyodik asit-Schiff , karbonhidratları ( glikojen , glikoprotein , proteoglikanlar ) işaretlemek için kullanılan özel bir histoloji boyasıdır . PAS, farklı glikojen depolama hastalıklarını ayırt etme çabalarında yapılan glikojen birikintilerinin yapıldığı karaciğer dokusunda yaygın olarak kullanılır. PAS önemlidir, çünkü endokrin sistemin yumurtalık ve pankreas tümörlerinde ve ayrıca böbrek sisteminin mesane ve böbreklerinde bulunan glikojen granüllerini saptayabilir. Bazal membranlar ayrıca bir PAS lekesinde görünebilir ve böbrek hastalığının teşhisinde önemli olabilir. Mantarların hif ve maya formlarının hücre duvarındaki yüksek miktarda karbonhidrat nedeniyle, Periyodik asit -Schiff boyası bu türlerin insan vücudunun doku örnekleri içinde bulunmasına yardımcı olabilir.
Masson'un üç renkli
Masson'un trikromu (adından da anlaşılacağı gibi) üç renkli bir boyama protokolüdür. Tarif, farklı spesifik uygulamalar için Masson'un orijinal tekniğinden geliştirilmiştir, ancak tümü, hücreleri çevreleyen bağ dokusundan ayırt etmek için çok uygundur . Çoğu tarif, kırmızı keratin ve kas lifleri, kollajen ve kemiğin mavi veya yeşil boyanmasını, sitoplazmanın açık kırmızı veya pembe boyanmasını ve siyah hücre çekirdeklerini üretir .
Romanowsky lekeleri
Romanowsky lekeleri , bir çok renkli boyama etkisi olarak kabul edilir ve eosin artı (kimyasal bir kombinasyonuna dayanmaktadır düşük eosin ) ve demetile metilen mavisi (oksidasyon ürünlerini içeren A mavisi ve gök B ). Bu boya, tüm hücre yapıları için değişen renkler geliştirir (“Romanowsky-Giemsa etkisi) ve bu nedenle nötrofil polimorflarının ve hücre çekirdeklerinin boyanmasında kullanılmıştır. Yaygın varyantlar arasında Wright boyası , Jenner boyası , May-Grunwald boyası, Leishman boyası ve Giemsa boyası bulunur .
Hepsi kan veya kemik iliği örneklerini incelemek için kullanılır . Farklı lökosit türleri (beyaz kan hücreleri) kolaylıkla ayırt edilebildiğinden , kan hücrelerinin incelenmesi için H&E'ye göre tercih edilirler. Hepsi aynı zamanda sıtma gibi kan yoluyla bulaşan parazitleri tespit etmek için kan incelemesi için de uygundur .
gümüş boyama
Gümüş boyama , histolojik kesitleri boyamak için gümüşün kullanılmasıdır . Bu tür boyama, proteinlerin (örneğin tip III kollajen ) ve DNA'nın gösterilmesinde önemlidir . Hem hücrelerin içindeki hem de dışındaki maddeleri göstermek için kullanılır . Gümüş boyama, sıcaklık gradyanlı jel elektroforezinde de kullanılır .
Argentaffin hücreleri, formalin fiksasyonundan sonra gümüş solüsyonunu metalik gümüşe indirger . Bu yöntem, İtalyan Camillo Golgi tarafından, gümüş nitrat ve potasyum dikromat arasındaki bir reaksiyon kullanılarak keşfedildi , böylece bazı hücrelerde gümüş kromat çöktürüldü (bakınız Golgi'nin yöntemi ). Bir rgyrofilik hücreler , indirgeyici içeren lekeye maruz kaldıktan sonra gümüş solüsyonu metalik gümüşe indirger . Bunun bir örneği hidrokinon veya formalin olabilir.
Sudan boyama
Sudan boyaması , genellikle lipidler de dahil olmak üzere sudanofilik maddeleri boyamak için Sudan boyalarını kullanır . Sudan III , Sudan IV , Oil Red O , Osmium tetroxide ve Sudan Black B sıklıkla kullanılır. Sudan boyama genellikle steatore teşhisinde dışkıdaki yağ seviyesini belirlemek için kullanılır .
Wirtz-Conklin boyama
Wirtz-Conklin boyası, ana boya olarak malakit yeşili boya ve karşı boya olarak safranin kullanılarak gerçek endosporları boyamak için tasarlanmış özel bir tekniktir. Bir kez boyandıklarında, renklerini kaybetmezler. Boyama işlemi sırasında ısı ilavesi büyük bir katkıda bulunan faktördür. Isı, boyanın girebilmesi için spor zarının açılmasına yardımcı olur. Bu lekenin asıl amacı bakteri sporlarının çimlenmesini göstermektir. Çimlenme süreci gerçekleşiyorsa, malakit yeşili nedeniyle spor yeşile dönecek ve çevreleyen hücre safraninden kırmızı olacaktır. Bu leke, bakteri hücresi içindeki sporun yönünü belirlemeye de yardımcı olabilir; terminal (uçta), subterminal (hücre içinde) veya merkezi (hücrenin tam ortasında) olup olmadığı.
Kollajen hibritleyici peptit boyama
Kolajen Hibritleştirici Peptid (CHP) boyama, herhangi bir tipteki (Tip I, II, IV, vb.) denatüre kolajenleri, enzimatik, mekanik, kimyasal veya termal yollarla hasar görmüş veya bozulmuş olmalarına bakılmaksızın boyamak için kolay ve doğrudan bir yol sağlar. Dokudaki mevcut tek ipliklerle kolajen üçlü sarmalına yeniden katlanarak çalışırlar. CHP'ler basit bir floresan mikroskobu ile görüntülenebilir .
Ortak biyolojik lekeler
Farklı lekeler, bir hücrenin veya dokunun farklı bölümlerinde reaksiyona girer veya konsantre olur ve bu özellikler, belirli bölümleri veya alanları ortaya çıkarmak için avantaj sağlamak için kullanılır. En yaygın biyolojik lekelerin bazıları aşağıda listelenmiştir. Aksi belirtilmedikçe, bu boyaların tümü, sabitlenmiş hücreler ve dokular ile kullanılabilir; vital boyalar (canlı organizmalarla kullanıma uygun) not edilmiştir.
akridin portakal
Akridin portakalı (AO), hücre döngüsü tayini için faydalı bir nükleik asit seçici floresan katyonik boyadır. Hücre geçirgendir ve DNA ve RNA ile interkalasyon veya elektrostatik çekimler yoluyla etkileşime girer. DNA'ya bağlandığında spektral olarak floreseine çok benzer. Floresan gibi, katı bir doku numunesinin yüzeyindeki geleneksel olarak boyanmış hücrelerin arkadan aydınlatılması için spesifik olmayan bir boyama olarak da faydalıdır (floresan arkadan aydınlatmalı boyama).
Bismarck kahverengi
Bismarck kahverengi (ayrıca Bismarck kahverengi Y veya Manchester kahverengi) asit müsinlerine sarı bir renk verir . ve mast hücrelerine yoğun bir kahverengi renk. Bu lekenin bir varsayılanı, onu çevreleyen diğer tüm yapıları lekelemesi ve kontrastın kalitesini düşürmesidir. Kullanışlı olması için diğer lekelerle eşleştirilmesi gerekir. Bismark kahverenginin yanında kullanılan bazı tamamlayıcı boyalar, histoloji numunesi içinde daha iyi kontrast sağlayan Hematoksilen ve Toluidin mavisidir.
karmin
Carmine , glikojeni boyamak için kullanılan yoğun kırmızı bir boyadır , Carmine alum ise nükleer bir boyadır. Karmin lekeleri mordan, genellikle alüminyum kullanılmasını gerektirir .
Coomassie mavisi
Coomassie mavisi (ayrıca parlak mavi), proteinleri spesifik olmayan bir şekilde güçlü bir mavi renge boyar. Jel elektroforezinde sıklıkla kullanılır.
kresil menekşe
Cresyl violet , nöronal sitoplazmanın asidik bileşenlerini, özellikle nissl cisimlerini menekşe rengine boyar . Genellikle beyin araştırmalarında kullanılır.
Kristal Menekşe
Kristal menekşe , uygun bir mordanla birleştirildiğinde hücre duvarlarını mor renge boyar . Kristal menekşe, Gram boyamada kullanılan boyadır.
DAPI
DAPI , ultraviyole ışıkla uyarılan ve DNA'ya bağlandığında güçlü mavi flüoresans gösteren flüoresan nükleer bir lekedir . DAPI, A=T bakımından zengin kromozom tekrarlarıyla bağlanır. DAPI, normal transmisyon mikroskopisi ile de görülmez. Canlı veya sabit hücrelerde kullanılabilir. DAPI lekeli hücreler özellikle hücre sayımı için uygundur.
eozin
Eozin çoğunlukla sitoplazmik materyale, hücre zarlarına ve bazı hücre dışı yapılara pembe veya kırmızı bir renk veren hematoksilene karşı bir karşıt olarak kullanılır . Ayrıca kırmızı kan hücrelerine güçlü bir kırmızı renk verir . Eozin ayrıca Gram boyamanın bazı varyantlarında ve diğer birçok protokolde bir karşı boyama olarak kullanılabilir. Aslında, yaygın olarak eozin olarak adlandırılan çok yakından ilişkili iki bileşik vardır. En sık kullanılan eozin Y'dir (eozin Y ws veya eozin sarımsı olarak da bilinir); çok hafif sarımsı bir dökümü var. Diğer eozin bileşiği, eozin B'dir (eozin mavimsi veya emperyal kırmızı); çok soluk mavimsi bir dökümü var. İki boya birbirinin yerine kullanılabilir ve birinin veya diğerinin kullanımı daha çok bir tercih ve gelenek meselesidir.
etidyum bromür
Etidyum bromür , DNA'yı araya sokar ve boyayarak floresan kırmızı-turuncu bir leke sağlar. Sağlıklı hücreleri lekelemese de, apoptozun son aşamalarında olan hücreleri tanımlamak için kullanılabilir - bu tür hücrelerin çok daha geçirgen zarları vardır . Sonuç olarak, etidyum bromür genellikle hücre popülasyonlarında apoptoz için bir belirteç olarak ve jel elektroforezinde DNA bantlarının yerini belirlemek için kullanılır . Boya, canlı hücre sayımında akridin portakalı (AO) ile birlikte de kullanılabilir . Bu EB/AO kombine boyama, canlı hücrelerin yeşil floresan vermesine neden olurken, apoptotik hücreler ayırt edici kırmızı-turuncu floresansı korur.
asit fuksin
Asit fuksin , kolajen, düz kas veya mitokondriyi boyamak için kullanılabilir . Mallory'nin trikrom yönteminde nükleer ve sitoplazmik boya olarak asit fuksin kullanılır. Asit fuksin, Masson trikromunun bazı varyantlarında sitoplazmayı boyar. Van Gieson'un pikro-fuşininde asit fuksin, kırmızı rengini kolajen liflerine verir. Asit fuksin aynı zamanda mitokondri için geleneksel bir lekedir (Altmann'ın yöntemi).
hematoksilen
Hematoksilen (Kuzey Amerika'daki hematoksilen) nükleer leke. Bir mordanla birlikte kullanıldığında, hematoksilen çekirdekleri mavi-mor veya kahverengiye boyar. Histolojide en yaygın prosedürlerden biri olan H&E boyamasında (hematoksilen ve eozin) en sık eozin ile birlikte kullanılır .
Hoechst lekeleri
Hoechst a, bis -benzimidazol türevi bileşik bağlandığım küçük oluk bölgesinin DNA . DNA boyaması için floresan mikroskopisinde sıklıkla kullanılan Hoechst boyaları, sulu çözeltilerde çözündüğünde sarı görünür ve UV uyarımı altında mavi ışık yayar. İki ana Hoechst türü vardır : Hoechst 33258 ve Hoechst 33342 . İki bileşik işlevsel olarak benzerdir, ancak yapı olarak küçük bir fark vardır. Hoechst 33258 bir terminal hidroksil grubu içerir ve bu nedenle sulu çözeltide daha fazla çözünür, ancak bu özellikler plazma zarına nüfuz etme kabiliyetini azaltır . Hoechst 33342 , terminal hidroksil grubu (yani bir etil eter grubu) üzerinde bir etil ikamesi içerir ve bu onu daha kolay plazma zarı geçişi için daha hidrofobik hale getirir
İyot
İyot , kimyada nişasta göstergesi olarak kullanılır . Nişasta çözelti içinde iyot ile karıştırıldığında, nişasta/iyot kompleksini temsil eden yoğun koyu mavi bir renk oluşur. Nişasta, çoğu bitki hücresinde ortak olan bir maddedir ve bu nedenle zayıf bir iyot çözeltisi, hücrelerde bulunan nişastayı lekeleyecektir. İyot, mikrobiyolojide kullanılan Gram boyama olarak bilinen boyama tekniğinin bir bileşenidir . Gram boyamasında mordan olarak kullanılan iyot, hücre duvarında/membranında bulunan gözeneklerden boyanın girişini arttırır.
Lugol çözeltisi veya Lugol iyodu (IKI), nişastaların varlığında siyaha dönen ve hücre lekesi olarak kullanılabilen ve hücre çekirdeklerini daha görünür hale getiren kahverengi bir çözeltidir .
Sirke (asetik asit) ile birlikte kullanılan Lugol solüsyonu, biyopsi hazırlığında "Pap smear" takip muayeneleri sırasında servikal ve vajinal dokulardaki kanser öncesi ve kanserli değişiklikleri belirlemek için kullanılır . Asetik asit, anormal hücrelerin beyazlamasına neden olurken, normal dokular iyottan maun kahverengisi boyar.
Malahit yeşili
Malakit yeşili (elmas yeşili B veya victoria yeşili B olarak da bilinir), bakteriler için Gimenez boyama tekniğinde safranin için mavi-yeşil bir karşıt olarak kullanılabilir . Sporları doğrudan boyamak için de kullanılabilir .
Metil yeşili
Metil yeşili , hücrelerin kromatinini boyamak için parlak alan ve floresan mikroskoplarda yaygın olarak kullanılır, böylece daha kolay görüntülenebilirler.
Metilen mavisi
Metilen mavisi , insan yanak hücreleri gibi hayvan hücrelerini çekirdeklerini daha gözlemlenebilir hale getirmek için boyamak için kullanılır. Ayrıca sitolojide kan filmlerini boyamak için kullanılır.
nötr kırmızı
Nötr kırmızı (veya toluilen kırmızısı) Nissl maddesini kırmızıya boyar . Genellikle diğer boyalarla kombinasyon halinde bir karşı leke olarak kullanılır.
Nil mavisi
Nil mavisi (veya Nil mavisi A) çekirdekleri maviye boyar. Canlı hücrelerle kullanılabilir.
Nil kırmızısı
Nil kırmızısı (Nil mavisi oksazon olarak da bilinir), Nil mavisinin sülfürik asit ile kaynatılmasıyla oluşur . Bu, Nil kırmızısı ve Nil mavisinin bir karışımını üretir. Nil kırmızısı, lipofilik bir lekedir; hücrelerin içindeki lipid globüllerinde birikerek onları kırmızıya boyar. Nil kırmızısı canlı hücrelerle kullanılabilir. Lipidlere bölündüğünde güçlü bir şekilde floresan verir, ancak sulu çözeltide pratik olarak hiç değildir.
Osmiyum tetroksit (resmi adı: osmiyum tetraoksit)
Osmiyum tetraoksit , optik mikroskopta lipitleri boyamak için kullanılır . Yağlarda çözünür ve organik maddeler tarafından kolayca görülebilen siyah bir madde olan elemental osmiyuma indirgenir.
propidyum iyodür
Propidium iyodür , hücreleri boyamak için kullanılabilen bir floresan interkalasyon maddesidir. Propidium iyodür, hücre döngüsü analizinde hücre canlılığını veya DNA içeriğini değerlendirmek için akış sitometrisinde bir DNA lekesi olarak veya çekirdeği ve diğer DNA içeren organelleri görselleştirmek için mikroskopide kullanılır. Propidium İyodür canlı hücrelerin zarını geçemez, bu da nekrotik, apoptotik ve sağlıklı hücrelerin ayırt edilmesini sağlar. PI ayrıca RNA'ya bağlanır ve RNA ile DNA boyamasını ayırt etmek için nükleazlarla tedaviyi gerektirir.
rodamin
Rodamin , floresan mikroskopisinde yaygın olarak kullanılan proteine özgü bir floresan boyadır.
safranin
Safranine (veya Safranine O) kırmızı bir katyonik boyadır. Kıkırdak ve mast hücrelerindeki glikozaminoglikanlar ve bitki dokularındaki lignin ve plastidlerin bileşenleri dahil olmak üzere çekirdeklere (DNA) ve diğer doku polianyonlarına bağlanır. Safranin, hayvan (insan dahil) dokularında diğer boyaların çekirdeğe ve sitoplazmaya verdiği mavi ve kırmızı renklerle kontrast oluşturmak için kolajene sarı bir renk vermek için bazı yöntemlerde kullanılan pahalı bir doğal boya olan safran ile karıştırılmamalıdır.
Yanlış yazım "safranin" yaygın olarak kullanılmaktadır. -ine sonu safranin O için uygundur çünkü bu boya bir amindir,
Dokuların boyanabilirliği
Lekeleri tutan dokulara kromatik denir . Kromozomlar , menekşe lekesini emme yeteneklerinden dolayı bu şekilde adlandırılmıştır.
Belirli bir leke için pozitif afinite -filik son eki ile belirtilebilir . Örneğin masmavi bir lekeyle lekelenen dokular azurofilik olarak adlandırılabilir . Bu aynı zamanda, asidik boyalarla (en dikkat çekeni eozin ) boyanan dokular için asidofilik , bazik boyalarda boyandığında bazofilik ve asit veya bazik boyalarla boyandığında amfofilik gibi daha genel boyama özellikleri için de kullanılabilir . Buna karşılık, kromofobik dokular renkli boyayı kolayca almazlar.
Elektron mikroskobu
Işık mikroskobunda olduğu gibi, transmisyon elektron mikroskobunda kontrastı arttırmak için lekeler kullanılabilir . Ağır metallerin elektron yoğun bileşikleri tipik olarak kullanılır.
fosfotungstik asit
Fosfotungstik asit , virüsler , sinirler , polisakkaritler ve diğer biyolojik doku materyalleri için yaygın bir negatif lekedir . Çoğunlukla % 0,5-2 ph formunda kullanılır ve onu nötr hale getirir ve sulu bir çözelti yapmak için su ile eşleştirilir. Fosfotungstik asit, numuneyi çevreleyen arka planı karanlık ve numunenin kendisini açık hale getiren elektron yoğun madde ile doldurulur. Bu işlem, örneğin karanlık olduğu ve arka planın açık kaldığı durumlarda boyama için normal pozitif teknik değildir.
osmiyum tetroksit
Osmiyum tetroksit , lipitleri boyamak için optik mikroskopta kullanılır . Yağlarda çözünür ve organik maddeler tarafından kolayca görülebilen siyah bir madde olan elemental osmiyuma indirgenir. Elektronları emen ağır bir metal olduğu için biyolojik elektron mikroskobunda morfoloji için kullanılan belki de en yaygın lekedir. Ayrıca, TEM ile morfolojilerinin incelenmesi için çeşitli polimerlerin boyanması için de kullanılır. OsO
4çok uçucu ve son derece zehirlidir. Osmiyum +8 oksidasyon sayısına sahip olduğu için güçlü bir oksitleyici ajandır. Birçok malzemeyi agresif bir şekilde oksitler ve daha düşük oksidasyon durumunda uçucu olmayan bir osmiyum tortusu bırakır.
rutenyum tetroksit
Rutenyum tetroksit , osmiyum tetraoksitten eşit derecede uçucu ve hatta daha agresiftir ve osmiyum lekesine dirençli malzemeleri bile lekeleyebilir, örneğin polietilen.
Elektron mikroskobu boyama kullanılan diğer kimyasal maddeler şunlardır: amonyum molibdat , kadmiyum iyodür , karbohidrazid , ferrik klorür , heksamine , indiyum triklorür , lantan (III) nitrat , kurşun asetat , kurşun sitrat , kurşun (II) nitrat , periyodik asit , fosfomolibdik asit , potasyum ferrisiyanür , potasyum ferrosiyanür , rutenyum kırmızısı , gümüş nitrat , gümüş proteinat , sodyum kloroaurat , talyum nitrat , tiyosemikarbazid , uranil asetat , uranil nitrat ve vanadil sülfat .
Ayrıca bakınız
- Biyolojik Leke Komisyonu : Üçüncü taraf kalite kontrol ve lekelerin sertifikasyonu
- sitoloji : hücre bilimi
- Histoloji : dokuları inceleyen bilim dalı
- İmmünohistokimya : Spesifik antijenleri etiketlemek için antiserum kullanımı
- Rutenyum(II) tris(batofenantrolin disülfonat) , bir protein boyası.
- Hayati leke : Hücreleri öldürmeyen lekeler
- SAYFA : protein moleküllerinin ayrılması
- Baryum lavman - ışık spektrumunun x-ışını kısmında kontrast oluşturan bir tür in vivo leke
- diyafonizasyon
Referanslar
daha fazla okuma
- Bancroft JD, Gamble M, ed. (2002). Histolojik Tekniklerin Teorisi ve Uygulaması (5. baskı). Londra: Churchill-Livingstone. ISBN'si 978-0-443-06435-7.
- Kiernan JA (2015). Histolojik ve Histokimyasal Yöntemler. Teori ve Uygulama . Banbury, Birleşik Krallık: Scion. ISBN'si 978-1-907904-32-5.
- Presnell JK, Schreibman MP (1997). Humason'ın Hayvan doku Teknikleri (5. baskı). Baltimore: Johns Hopkins University Press.
- Ruzin SE (1999). Bitki Mikrotekniği ve Mikroskopi . New York: Oxford University Press. ISBN'si 978-0-19-508956-1.
Dış bağlantılar
Boyama hakkında kütüphane kaynakları |
- Biyolojik Leke Komisyonu , 1920'lerin başından beri boyaları test eden ve uluslararası kabul görmüş standartları karşılayan boya partileri için onay Sertifikaları veren, kar amacı gütmeyen bağımsız bir şirkettir.
- Boyalar ve boyama teknikleri için StainsFile Referansı.
- Protozoa için Vital Boyama ve İlgili Geçici Montaj Teknikleri ~ Howey, 2000
- Fiksasyondan Konuşmak: Kısım 1 ve Kısım 2 – M. Halit Umar
- Histoloji Lekelerinin Fotomikrografları
- Sridhar Rao PN'nin ana sayfasında boyama alıştırmalarında sık sorulan sorular