Gümüş boyama - Silver staining
Gelen patoloji , gümüş boyama kullanılmasıdır gümüş seçici bir hedefin görüntüsünün farklılaştırılması için, mikroskopi ve histolojik bölümler ; içinde ısı gradyan jel elektroforezi ; ve poliakrilamid jellerde .
Geleneksel vitrayda , gümüş lekesi , gümüş bileşikleri (özellikle gümüş nitrat ) içeren bir karışım ekleyerek ve hafifçe ateşleyerek sarıdan turuncuya veya kahverengiye (veya mavi cam bazında yeşil) tonlar üretme tekniğidir . 1800'den kısa bir süre sonra tanıtıldı ve "vitray" terimindeki "leke" dir. Gümüş bileşikleri bağlayıcı maddelerle karıştırılır, cam yüzeyine uygulanır ve daha sonra bir fırında veya fırında ateşlenir.
Tarih
Camillo Golgi , sinir sistemi çalışması için gümüş boyamayı mükemmelleştirdi . Bunun gerçekleştiği kesin kimyasal mekanizma bilinmemekle birlikte, Golgi'nin yöntemi sınırlı sayıda hücreyi kendi bütünlükleri içinde rastgele boyar.
Gümüş boyama proteinlerin eser miktarda tespit etmek için hassas bir prosedür olarak Kerényi ve Gallyas tarafından tanıtılan jeller . Teknik, çeşitli desteklerle ayrılmış diğer biyolojik makromoleküllerin incelenmesine kadar genişletildi .
Klasik Coomassie Brilliant Blue boyaması genellikle 50 ng protein bandını algılayabilir; gümüş boyama hassasiyeti tipik olarak 50 kat artırır.
Birçok değişken renk yoğunluğunu etkileyebilir ve her proteinin kendi boyama özellikleri vardır; temiz cam eşyalar, saf reaktifler ve en yüksek saflıkta su, başarılı boyamanın kilit noktalarıdır.
Kimya
Bazı hücreler argentaffin'dir . Bunlar formalin fiksasyonundan sonra gümüş solüsyonunu metalik gümüşe indirger . Diğer hücreler argirofiliktir . Bunlar , hidrokinon veya formalin gibi bir indirgeyici içeren lekeye maruz kaldıktan sonra gümüş solüsyonunu metalik gümüşe indirger .
Gümüş nitrat , fosfat iyonları ile çözünmeyen gümüş fosfat oluşturur ; bu yöntem Von Kossa Lekesi olarak bilinir . Bir indirgeyici maddeye, genellikle hidrokinona maruz kaldığında , siyah temel gümüşü oluşturur. Bu, kemik büyümesi sırasında kalsiyum fosfat parçacıklarının oluşumunu incelemek için kullanılır .
Uygulamalar
histolojik karakterizasyon
Gümüş boyama, ilgilenilen hedefler üzerinde metalik gümüş parçacıklarının birikmesiyle tip III kollajen ve retikülin lifleri gibi DNA ve proteinler gibi hücre içi ve hücre dışı hücresel bileşenler gibi ilgili hedeflerin görselleştirilmesine yardımcı olur .
Teşhis mikrobiyoloji
Pseudomonas , Legionella , Leptospira , H. pylori , Bartonella ve Treponema ve Pneumocystis , Cryptococcus ve Candida gibi mantarlargümüşle boyanmış organizmalardır.
karyotip analizi
Karyotiplemede gümüş boyama kullanılır . Gümüş nitrat, nükleolar organizasyon bölgesi (NOR) ile ilişkili proteini boyar, gümüşün biriktiği karanlık bir bölge üretir ve NOR içindeki rRNA genlerinin aktivitesini gösterir . İnsan kromozomları 13, 14, 15, 21 ve 22, gümüş leke aktivitesini en az 50 kat artıran NOR'lara sahiptir.
Genomik ve proteomik analiz
Jelleri boyamak için gümüş boyama kullanılır. Agaroz jellerindeki proteinlerin gümüş boyası 1973 yılında Kerenyi ve Gallyas tarafından geliştirilmiştir. Daha sonra , SDS-PAGE'de kullanılan poliakrilamid jellere ve ayrıca DNA veya RNA'yı boyamak için uyarlanmıştır . Glikolizasyonlar arasında glikoproteinlerin ve polisakaritler ,% 0.1 ile 1 saatlik ön işlem ile oksidize edilebilir periyodik asit gümüş iyonları ve boyama sonucunda bağlanmasını geliştirir, 4 ° C'de bekletildi.
İlk olarak, proteinler jel içinde %10 asetik asit ve %30 etanolden oluşan sabitleyici bir çözelti ile denatüre edilir ve çökeltilir, aynı zamanda deterjan (çoğunlukla SDS ) özütlenir. Böylece proteinlerin difüzyonu önemli ölçüde azalır. Su ile tekrar tekrar yıkandıktan sonra jel, gümüş nitrat solüsyonunda inkübe edilir . Gümüş iyonları, proteinlerin negatif yüklü yan zincirlerine bağlanır. Fazla gümüş iyonları daha sonra su ile yıkanır. Son geliştirme aşamasında, gümüş iyonları, alkali formaldehit ilavesiyle elementel gümüşe indirgenir . Bu, proteinlerin bulunduğu bölgeleri kahverengiden siyaha boyar.
Boyamanın yoğunluğu proteinin birincil yapısına bağlıdır . Ayrıca kullanılan kapların temizliği ve reaktiflerin saflığı gümüş lekesini etkiler. Gümüş lekeli jellerdeki yaygın artefaktlar , elektroforezden önce numunenin kontaminasyonu olarak 54-57 kDa ve 65-68 kDa aralığında keratin bantlarıdır .
Metenamin gümüş lekeleri
Aşağıdakiler dahil, metenamin içeren birkaç gümüş leke vardır :
- Grocott'un metenamin gümüş boyası , yaygın olarak mantar organizmaları için bir ekran olarak kullanılır .
- Jones'un boyası , bir metenamin gümüş -Periyodik asit-Schiff , bazal membran için boyanır , membranöz glomerülonefrit ile ilişkili "çivili" GBM'yi görüntülemeye yarar .
Galeri
Karaciğer biyopsisinde mantar Histoplasma'yı (siyah yuvarlak toplar) gösteren gümüş bir leke ( GMS ) .
Değişken basit dizi tekrarı (SSR, diğer adıyla mikro uydu) lokusunu hedefleyen primerler ile PCR kullanılarak amplifiye edilen Littorina plena örneklerinden bir dizi DNA örneği . Örnekler %5 poliakrilamid jel üzerinde çalıştırıldı ve gümüş boyama kullanılarak görselleştirildi.
Referanslar
Dış bağlantılar
- MedEd, Loyola Histo/practical/stains/hp2-55.html'de
- [1] Hempelmann E. SDS-Protein PAGE ve Plasmodium falciparum proteinlerinin gümüş boyama ve immünoblotlama yoluyla protein tespiti. içinde: Moll K, Ljungström J, Perlmann H, Scherf A, Wahlgren M (eds) Methods in Malaria Research, 5. baskı, 2008, 263-266