Ziehl–Neelsen boyası - Ziehl–Neelsen stain

Ziehl–Neelsen boyası kullanılarak Mycobacterium tuberculosis görselleştirmesi
Ziehl–Neelsen (aside dirençli) lekesi – temel adımların diyagramı

Ziehl–Neelsen boyaması , ilk olarak Paul Ehrlich tarafından tanıtılan aside dayanıklı bir boyama türüdür . Ziehl–Neelsen boyaması , başta Mikobakteriler olmak üzere aside dirençli organizmaları tanımlamak için kullanılan bakteriyolojik bir boyamadır . Lekeyi değiştiren iki Alman doktor için adlandırılmıştır: bakteriyolog Franz Ziehl (1859-1926) ve patolog Friedrich Neelsen (1854-1898).

mikobakteriler

Anatomik patoloji örneklerinde, immünohistokimya ve Ziehl-Neelsen boyamasının modifikasyonları ( Fite-Faraco yöntemi gibi ) karşılaştırılabilir tanısal faydaya sahiptir. Her ikisi de geleneksel Ziehl-Neelsen boyamasından üstündür.

Mycobacterium cinsi, hafif kavisli veya düz küçük çubuklardan oluşan ve gram pozitif olarak kabul edilen yavaş büyüyen bir bakteridir. Bazı Mikobakteri türleri dallar veya filamentler oluşturur. Bazı mikobakteriler serbest yaşayan saprofitlerdir, ancak çoğu hayvanlarda ve insanlarda hastalığa neden olan patojenlerdir. Mycobacterium bovis sığırlarda tüberküloza neden olur. Tüberküloz insanlara bulaşabileceğinden, herhangi bir bakteriyi öldürmek için süt pastörize edilir. İnsanlarda hastalığa neden olan bazı Mikobakteri türleri arasında Mycobacterium leprae , Mycobacterium kansasii , Mycobacterium marinum , Mycobacterium bovis , Mycobacterium africanum ve Mycobacterium avium kompleksinin üyeleri bulunur . Mycobacterium tuberculosis , tüberküloza (TB) neden olan bir Mycobacterium türüdür . Mycobacterium tuberculosis, tipik olarak insan akciğerlerini enfekte eden hava kaynaklı bir bakteridir. TB'nin belirtileri arasında kötü bir öksürük, göğüs ağrısı, yorgunluk, kilo kaybı, iştahsızlık, titreme, ateş ve gece terlemeleri sayılabilir. Latent TB enfeksiyonunu tedavi etmek için tipik rejim, izoniazid, rifapentin ve rifampin kullanımını içerir. İlaca dirençli bir TB suşu geliştirenler için rejim değiştirilir. TB testi, kan testi, cilt testleri ve göğüs röntgenlerini içerir. Tüberküloz yaymalarına bakıldığında aside dayanıklı bir boya kullanılarak boyandığı görülür. Mycobacterium gibi Aside dirençli bu organizmalar, hücre duvarlarında mikolik asit adı verilen büyük miktarda lipid maddesi içerir. Bu asitler, Gram boyama gibi sıradan yöntemlerle lekelenmeye karşı direnç gösterirler . Nocardia gibi birkaç başka bakteriyi boyamak için de kullanılabilir . Ziehl–Neelsen boyaması için kullanılan reaktifler – karbol fuksin , asit alkol ve metilen mavisidir . Aside dirençli basiller boyandıktan sonra parlak kırmızıdır.

mantarlar

Ziehl-Neelsen boyaması, bir tür dar spektrumlu mantar lekesidir. Dar spektrumlu mantar lekeleri seçicidir ve mantarları ayırt etmeye ve tanımlamaya yardımcı olabilirler. Ziehl-Neelsen boyamasının sonuçları değişkendir çünkü birçok mantar hücre duvarı asit hızlı değildir. Genellikle Ziehl-Neelsen boyaması ile boyanan yaygın bir aside dayanıklı mantar türü örneği Histoplasma (HP) olarak adlandırılır. Histoplazma toprakta, kuşların ve yarasaların dışkısında bulunur. İnsanlar, mantar sporlarının solunmasıyla histoplazmoza yakalanabilir. Histoplazma vücuda girer ve sporların mayaya dönüştüğü akciğerlere gider. Maya kan dolaşımına girer ve lenf düğümlerini ve vücudun diğer kısımlarını etkiler. Genellikle insanlar sporları solumaktan hastalanmazlar, ancak yaparlarsa genellikle grip benzeri semptomlar gösterirler. Bu boyama yönteminin başka bir varyasyonu, mikolojide , Russula cinsindeki belirli mantar türlerinin kütikül hiflerindeki aside dirençli kabuklanmaları farklı şekilde boyamak için kullanılır . Bazı serbest endosporlar küçük mayalarla karıştırılabilir, bu nedenle bilinmeyen mantarları tanımlamak için boyama kullanılır. Ayrıca Cryptosporidium ve Isospora gibi bazı protozoaların tanımlanmasında da yararlıdır . Ziehl-Neelsen boyası, yumurta ve parazit (O&P) için balgam numunesindeki yumurtalar leke tarafından çözülebildiğinden paragonimiasis vakalarında tanıyı engelleyebilir ve paragonimiasisin belirti ve semptomları birbirine çok benzediği için bu klinik ortamda sıklıkla kullanılır. TB'den olanlar.

Tarih

1882'de Robert Koch , tüberkülozun etiyolojisini keşfetti. Koch'un keşfinden kısa bir süre sonra Paul Ehrlich, mikobakteri tüberkülozu için şap hematoksilen boyası adı verilen bir boya geliştirdi. Franz Ziehl daha sonra mordan olarak karbolik asit kullanarak Ehrlich'in boyama tekniğini değiştirdi. Friedrich Neelsen, Ziehl'in mordan seçimini korudu, ancak birincil lekeyi carbol fuchsin olarak değiştirdi. Ziehl ve Neelsen'in modifikasyonları birlikte Ziehl–Neelsen boyasını geliştirmiştir. Joseph Kinyoun tarafından, Ziehl-Neelsen boyama tekniği kullanılarak, ancak prosedürden ısıtma adımı kaldırılarak başka bir aside dayanıklı boyama geliştirildi. Kinyoun'dan gelen bu yeni lekeye Kinyoun lekesi adı verildi.

prosedür

Tipik bir AFB boyama prosedürü, süspansiyon halindeki hücrelerin bir slayt üzerine bırakılmasını, ardından sıvının havada kurutulmasını ve hücrelerin ısıyla sabitlenmesini içerir.

Aside dirençli boyamanın özeti (Ziehl–Neelsen boyası)
Uygulama reaktif hücre rengi
asit hızlı Asitsiz hızlı
Birincil boya karbon fuksin kırmızı kırmızı
renk giderici asit alkol kırmızı Renksiz
karşı leke Metilen mavisi / malakit yeşili kırmızı Mavi

Çalışmalar, kültürü olmayan bir AFB lekesinin negatif bir tahmin değerinin zayıf olduğunu göstermiştir. Bir AFB boyası ile birlikte bir AFB kültürü yapılmalıdır; bunun çok daha yüksek bir negatif tahmin değeri vardır.

Asit hızlı hücrelerde ve aside dayanıklı olmayan hücrelerde asit hızlı boyama mekanizması.

Mekanizma açıklaması

Başlangıçta, karbol fuksin her hücreyi boyar. Asit-alkol ile boyandıklarında, aside dayanıklı bakteriler gibi kalın, mumsu bir lipid tabakasına sahip olmadıkları için sadece aside dayanıklı olmayan bakteriler lekelenir. Karşı leke uygulandığında, aside dayanıklı olmayan bakteriler onu alır ve mikroskop altında bakıldığında mavi (metilen mavisi) veya yeşil (malakit yeşili) olur. Aside dirençli bakteriler, karbol fuksini tutar, böylece kırmızı görünürler.

Değişiklikler

  • Aktinomisetler , nocardia için %1 sülfürik asit alkol .
  • izospora , siklospora ookistleri için % 0,5-1 sülfürik asit alkol .
  • Bakteriyel endosporlar için %0,25–0,5 sülfürik asit alkol.
  • Diferansiyel boyama – buzlu asetik asit kullanıldı, ısı uygulanmadı, ikincil boyama Loeffler'in metilen mavisidir.
  • Kinyoun modifikasyonu (veya soğuk Ziehl–Neelsen tekniği) de mevcuttur.
  • Fuksin boyama solüsyonunda yüksek derecede toksik fenol yerine bir deterjanın kullanıldığı bir protokol .

Ayrıca bakınız

Çevrimiçi protokol örnekleri

Referanslar

bibliyografya

  • "Vücut Sistemine Göre Hastalıklı Mikrobiyoloji", Robert W. Bauman, 2009, Pearson Education, Inc.

Dış bağlantılar