Anti-nükleer antikor - Anti-nuclear antibody

dsDNA antikorlarının immünofloresan boyama modelinin resmi.
HEp-20-10 hücreleri üzerinde çift sarmallı DNA antikorlarının homojen immünofloresan boyama modeli. Fazlar arası hücreler homojen nükleer boyanma gösterirken mitotik hücreler yoğunlaştırılmış kromozom bölgelerinin boyanmasını gösterir.

Antinükleer antikorlar ( ANA'lar , ayrıca antinükleer faktör veya ANF olarak da bilinir ) , hücre çekirdeğinin içeriğine bağlanan otoantikorlardır . Normal bireylerde, bağışıklık sistemi yabancı proteinlere ( antijenler ) karşı antikor üretir, ancak insan proteinlerine ( otoantijenler ) karşı antikor üretmez . Bazı durumlarda, insan antijenlerine karşı antikorlar üretilir.

ANA'nın anti-Ro antikorları , anti-La antikorları , anti-Sm antikorları , anti-nRNP antikorları , anti- Scl -70 antikorları , anti-dsDNA antikorları , anti-histon antikorları , nükleer gözenek komplekslerine karşı antikorlar gibi birçok alt tipi vardır. , anti-sentromer antikorları ve anti-sp100 antikorları . Bu antikor alt tiplerinin her biri, çekirdek içindeki farklı proteinlere veya protein komplekslerine bağlanır. Duruma bağlı olarak farklı antikor prevalansları ile otoimmünite , kanser ve enfeksiyon gibi birçok bozuklukta bulunurlar . Bu, sistemik lupus eritematozus , Sjögren sendromu , skleroderma , karışık bağ dokusu hastalığı , polimiyozit , dermatomiyozit , otoimmün hepatit ve ilaca bağlı lupus dahil olmak üzere bazı otoimmün bozuklukların tanısında ANA'ların kullanılmasına izin verir .

ANA testi, bireyin kan serumunda bulunan otoantikorları tespit eder . ANA'ları saptamak ve ölçmek için kullanılan yaygın testler, dolaylı immünofloresan ve enzime bağlı immünosorbent testidir (ELISA). İmmünofloresanda, otoantikorların seviyesi bir titre olarak rapor edilir . Bu, otoantikorların hala tespit edilebildiği en yüksek serum seyreltisidir. 1:160'a eşit veya daha büyük bir seyreltmede pozitif otoantikor titreleri genellikle klinik olarak anlamlı olarak kabul edilir. 1:160'ın altındaki pozitif titreler, özellikle yaşlılar olmak üzere, sağlıklı popülasyonun %20'sine kadar mevcuttur. 1:160 veya daha yüksek pozitif titreler, otoimmün bozukluklarla güçlü bir şekilde ilişkili olsa da, sağlıklı bireylerin %5'inde de bulunurlar. Otoantikor taraması, otoimmün bozuklukların tanısında faydalıdır ve seviyelerin izlenmesi, hastalığın ilerlemesini tahmin etmeye yardımcı olur. Bir tanıyı destekleyen başka klinik veya laboratuvar verileri yoksa, pozitif bir ANA testi nadiren yararlıdır.

Bağışıklık ve otoimmünite

İnsan vücudunun patojenlere karşı birçok savunma mekanizması vardır ve bunlardan biri de hümoral bağışıklıktır . Bu savunma mekanizması, bir bağışıklık uyarısına yanıt olarak antikorlar (büyük glikoproteinler ) üretir . Lenfositler ( T-hücreleri ve B-hücreleri ) ve antijen sunan hücreler dahil olmak üzere bağışıklık sisteminin birçok hücresi bu işlem için gereklidir . Bu hücreler, yabancı proteinlerin ( antijenler ) saptanması üzerine bir bağışıklık tepkisini koordine eder ve bu antijenlere bağlanan antikorlar üretir. Normal fizyolojide, insan proteinlerini ( otoantijenler ) tanıyan lenfositler ya programlanmış hücre ölümüne ( apoptoz ) uğrar ya da işlevsiz hale gelir. Bu kendi kendine tolerans , lenfositlerin insan hücresel antijenlerine karşı bir bağışıklık tepkisi başlatmaması gerektiği anlamına gelir. Ancak bazen bu süreç arızalanır ve insan antijenlerine karşı antikorlar üretilir, bu da otoimmün hastalığa yol açabilir.

ANA alt türleri

ANA'lar, bazı sağlıklı bireylerin yanı sıra birçok bozuklukta bulunur. Bu bozukluklar arasında şunlar bulunmaktadır: sistemik lupus eritematoz (SLE), romatoid artrit , Sjörgen sendromu , skleroderma , polimiyozit , dermatomyozit , primer biliyer siroz , ilaç kaynaklı lupus , otoimmün hepatit , çoklu skleroz , diskoid lupus , tiroid hastalığı , antifosfolipid sendromu , jüvenil idiyopatik artrit , psoriatik artrit , jüvenil dermatomiyozit , idiyopatik trombositopenik purpura , enfeksiyon ve kanser . Bu antikorlar, özgüllüklerine göre alt bölümlere ayrılabilir ve her alt küme, belirli bozukluklar için farklı eğilimlere sahiptir.

Ekstrakte edilebilir nükleer antijenler

Çıkarılabilir nükleer antijenler (ENA), otoimmün bozuklukları olan kişilerde orijinal olarak antikor hedefleri olarak tanımlanan bir grup otoantijendir . Hücre çekirdeğinden salin ile ekstrakte edilebildikleri için ENA olarak adlandırılırlar. ENA'lar , prototip serumu sağlayan donörün adı (Sm, Ro, La, Jo) veya antikorların bulunduğu hastalık ortamının adı (SS-) ile adlandırılan ribonükleoproteinler ve histon olmayan proteinlerden oluşur. A, SS-B, Scl-70).

Anti-Ro/SS-A ve anti-La/SS-B

HEp-20-10 hücreleri üzerinde anti-nükleer antikorların benekli İmmünofloresan boyama modeli. Bu boyama paterni, anti-Ro ve anti-La antikorlarında görülür.

Sırasıyla SS-A ve SS-B olarak da bilinen anti -Ro ve anti-La antikorları, ekzokrin bezleri etkileyen bir otoimmün bozukluk olan primer Sjögren sendromunda yaygın olarak bulunur . Her iki antikorun varlığı Sjögren sendromunun %30-60'ında bulunur, tek başına anti-Ro antikorları Sjögren sendromunun %50-70'inde ve deri tutulumu olan SLE'nin %30'unda bulunur ve anti-La antikorları nadiren izole halde bulunur. . Anti-La antikorları da SLE'de bulunur; ancak Sjögren sendromu da normalde mevcuttur. Anti-Ro antikorları ayrıca otoimmün karaciğer hastalıkları, çölyak hastalığı , otoimmün romatizmal hastalıklar, kardiyak neonatal lupus eritematozus ve polimiyozit gibi diğer bozukluklarda daha az sıklıkla bulunur . Hamilelik sırasında, anti-Ro antikorları plasentayı geçebilir ve bebeklerde kalp bloğuna ve yenidoğan lupusuna neden olabilir . Sjögren sendromunda, anti-Ro ve anti-La antikorları, erken başlangıç, artan hastalık süresi, parotis bezi büyümesi, bezlerin dışındaki hastalık ve bezlerin lenfositler tarafından infiltrasyonu ile ilişkilidir. Anti-Ro antikorları, 45kDa, 52kDa, 54kDa ve 60kDa proteinleri ve RNA içeren Ro-RNP kompleksinin bileşenlerine özgüdür . 60kDa DNA /RNA bağlayıcı protein ve 52kDa T-hücresi düzenleyici protein, anti-Ro antikorlarının en iyi karakterize edilmiş antijenleridir. Toplu olarak, bu proteinler , hyRNA'lar hY1-hY5 ile birleşen bir ribonükleoprotein (RNP) kompleksinin parçasıdır. La antijeni, Ro-RNP kompleksi ile bağlantılı olan RNA polimeraz III'ün 48kDa'lık bir transkripsiyon sonlandırma faktörüdür .

Sjögren sendromunda antikor üretim mekanizması tam olarak anlaşılamamıştır, ancak apoptoz (programlanmış hücre ölümü) ve moleküler taklit rol oynayabilir. Ro ve La antijenleri, apoptoza giren hücrelerin yüzeyinde eksprese edilir ve bağışıklık sisteminin hücreleri ile etkileşime girerek tükürük bezi içinde iltihaplanmaya neden olabilir. Antikorlar, çapraz reaktif antikorların hem virüs hem de insan proteinlerine bağlandığı moleküler taklit yoluyla da üretilebilir. Bu, antijenlerden biri olan Ro veya La ile meydana gelebilir ve daha sonra epitop yayılması olarak bilinen bir işlem yoluyla diğer proteinlere karşı antikorlar üretebilir . Retroviral gag proteini, La proteinine benzerlik gösterir ve Sjögren sendromundaki moleküler taklit için olası bir örnek olarak önerilmektedir.

Anti-Sm

Anti-Smith (Anti-Sm) antikorları, SLE için çok spesifik bir belirteçtir. SLE'si olmayan bireylerin yaklaşık %99'unda anti-Sm antikorları yoktur, ancak SLE'li kişilerin sadece %20'sinde antikorlar bulunur. Onlar ilişkili merkezi sinir sistemi tutulumu, böbrek hastalığı , akciğer fibrozis ve perikarditli SLE, ancak hastalık aktivitesi ile ilişkili değildir. Anti-Sm antikorlarının antijenleri, A ila G olarak adlandırılan küçük nükleer ribonükleoproteinlerin (snRNP'ler) çekirdek birimleridir ve U1, U2, U4, U5 ve U6 snRNP'lerine bağlanacaktır. En yaygın olarak antikorlar, B, B' ve D birimleri için spesifiktir. Moleküler ve epidemiyolojik çalışmalar, proteinin Epstein-Barr virüs proteinlerine biraz benzerlik göstermesi nedeniyle, anti-Sm antikorlarının moleküler taklit tarafından indüklenebileceğini düşündürmektedir .

Anti-nRNP/anti-U1-RNP

Anti- U1-RNP antikorları olarak da bilinen anti-nükleer ribonükleoprotein (anti-nRNP) antikorları , SLE'nin %30-40'ında bulunur. Genellikle anti-Sm antikorlarıyla birlikte bulunurlar, ancak farklı klinik ilişkilerle ilişkili olabilirler. SLE'ye ek olarak, bu antikorlar, karışık bağ dokusu hastalığı ile yüksek oranda ilişkilidir . Anti-nRNP antikorları, snRNP'lerin A ve C çekirdek birimlerini tanır ve bu nedenle öncelikle U1-snRNP'ye bağlanırlar. RNP'ye karşı bağışıklık tepkisi, nükleer bileşenlerin apoptotik kabarcıklarda hücre zarı üzerinde sunulmasından kaynaklanabilir. U1-RNP polipeptitleri ve Epstein-Barr virüsü polipeptitleri arasındaki benzerlik nedeniyle, moleküler taklit de bu proteinlere karşı antikor üretimi için olası bir mekanizma olarak önerilmiştir.

Anti-Scl-70/anti-topoizomeraz I

Anti-Scl-70 antikorları skleroderma ile bağlantılıdır . Antikorların skleroderma duyarlılığı yaklaşık %34'tür, ancak yaygın kutanöz tutulumu olan vakalarda (%40) daha yüksek ve sınırlı kutanöz tutulum için daha düşüktür (%10). Antikorların özgüllüğü diğer romatizmal hastalıklarda %98 ve normal bireylerde %99.6'dır. Sklerodermaya ek olarak, bu antikorlar SLE'li bireylerin yaklaşık %5'inde bulunur. Anti-Scl-70 antikorlarının antijenik hedefi topoizomeraz I'dir .

Anti-Jo-1

Anti-Jo-1 antikorları sıklıkla ANA'lara dahil edilse de, bunlar aslında sitoplazmik protein olan Histidil-tRNA sentetaz - histidin yüklü tRNA'nın sentezi için gerekli bir aminoasil-tRNA sentetazına karşı antikorlardır . Polimiyozit ve dermatomiyozit ile yüksek oranda ilişkilidirler ve diğer bağ dokusu hastalıklarında nadiren bulunurlar. Polimiyozitin yaklaşık %20-40'ı Jo-1 antikorları için pozitiftir ve çoğunda interstisyel akciğer hastalığı, HLA-DR3 ve HLA-DRw52 insan lökosit antijeni (HLA) belirteçleri bulunur; topluca Jo-1 sendromu olarak bilinir.

Anti-dsDNA

dsDNA antikoru. Değişken bölgeler (sarı), dsDNA ipliklerini tamamlayıcıdır. Bu antikorlar, SLE'li kişilerin serumlarında yaygın olarak bulunur.

Anti-çift sarmallı DNA (anti-dsDNA) antikorları , SLE ile yüksek oranda ilişkilidir. Bazı çalışmalarda neredeyse %100 alıntı yaparak, hastalık için çok spesifik bir belirteçtirler. Duyarlılık verileri %25 ile %85 arasında değişmektedir. Titreler olarak bilinen anti-dsDNA antikor seviyeleri, SLE'deki hastalık aktivitesi ile ilişkilidir; yüksek seviyeler daha aktif lupusu gösterir. Anti-dsDNA antikorlarının varlığı da lupus nefriti ile bağlantılıdır ve sebebinin onlar olduğuna dair kanıtlar vardır. Bazı anti-dsDNA antikorları, heparan sülfat , kollajen IV, fibronektin ve laminin gibi böbreğin glomerüler bazal membranında (GBM) bulunan diğer antijenlerle çapraz reaktiftir . Böbrek içindeki bu antijenlere bağlanma, iltihaplanma ve kompleman fiksasyonuna neden olarak böbrek hasarına neden olabilir. Yüksek DNA-bağlanma ve düşük C3 düzeylerinin varlığının SLE tanısı için son derece yüksek prediktif değere (%94) sahip olduğu gösterilmiştir. Anti-dsDNA antikorlarının, membran antijenlerine bağlandıklarında hücreler tarafından içselleştirilmesi ve daha sonra hücre yüzeyinde görüntülenmesi de mümkündür. Bu, böbrek içindeki T hücrelerinin inflamatuar yanıtlarını teşvik edebilir. Tüm anti-dsDNA antikorlarının lupus nefriti ile ilişkili olmadığını ve bunların yokluğunda diğer faktörlerin bu semptoma neden olabileceğini belirtmek önemlidir. Anti-dsDNA antikorlarının antijeni, çift ​​sarmallı DNA'dır .

Anti-histon antikorları

Anti-histon antikorları , ilaca bağlı lupuslu kişilerin %75-95'inin ve idiyopatik SLE'nin %75'inin serumunda bulunur . SLE'deki anti-dsDNA antikorlarının aksine, bu antikorlar komplemanı sabitlemez. En yaygın olarak ilaca bağlı lupusta bulunsalar da, bazı SLE, skleroderma , romatoid artrit ve farklılaşmamış bağ dokusu hastalığında da bulunurlar . Birçok ilacın ilaca bağlı lupusa neden olduğu bilinmektedir ve bunlar nükleozom içinde genellikle birkaç histon proteini ve DNA ile çapraz reaktif olan çeşitli antijenik hedefler üretir. Prokainamid , histon H2A ve H2B kompleksine karşı antikorlar üreten, ilaca bağlı bir lupus formuna neden olur.

Anti-gp210 ve anti-p62

Hem anti-glikoprotein-210 (anti-gp210) hem de anti-nükleoporin 62 (anti-p62) antikorları, nükleer membran bileşenlerine karşı antikorlardır ve primer biliyer sirozda (PBC) bulunur. Her antikor, PBC'nin yaklaşık %25-30'unda bulunur. Her iki antikorun antijenleri, nükleer membranın bileşenleridir . gp210, nükleer gözeneğin bileşenlerinin nükleer membrana sabitlenmesinde yer alan 200kDa'lık bir proteindir . p62 antijeni, 60kDa'lık bir nükleer gözenek kompleksidir.

Anti-sentromer antikorları

HEp-20-10 hücrelerinde anti-sentromer antikorlarının immünofloresan boyama modeli.

Anti-sentromer antikorları , CREST sendromu , primer biliyer siroz ve proksimal skleroderma olarak da bilinen sınırlı kutanöz sistemik skleroz ile ilişkilidir . Hepsi sentromer ile ilişkili altı bilinen antijen vardır ; CENP-A'dan CENP-F'ye. CENP-A, 17kDa histon H3 benzeri bir proteindir. CENP-B, heterokromatinin katlanmasında yer alan 80kDa DNA bağlayıcı bir proteindir . CENP-Cı katılan bir 140kDa proteindir kinetokor oluşumunu uyarır tertibatı. CENP-D, işlevi bilinmeyen 50 kDa'lık bir proteindir, ancak kromatin yoğunlaşmasında rol oynayan başka bir protein olan RCC1 ile homolog olabilir . CENP-E, kinesin motor protein ailesinden 312kDa'lık bir proteindir . CENP-F, mitoz sırasında geç G2 fazında kinetochore ile birleşen nükleer matristen gelen 367 kDa'lık bir proteindir . CENP-A, B ve C antikorları en yaygın olarak bulunur (sistemik sklerozun %16-42'si) ve Raynaud fenomeni, telenjiektaziler , akciğer tutulumu ve sistemik sklerozda erken başlangıç ile ilişkilidir .

anti-sp100

Anti-sp100 antikorları , primer biliyer sirozun (PBC) yaklaşık %20-30'unda bulunur . PBC'si olmayan birkaç kişide bulunurlar ve bu nedenle hastalığın çok spesifik bir belirtecidirler. sp100 antijeni nükleer cisimlerde bulunur; çekirdekte hücre büyümesi ve farklılaşmasında rol oynayabilecek büyük protein kompleksleri.

Anti-PM-Scl

Anti-PM-Scl antikorları, polimiyozit/sistemik skleroz (PM/SSc) örtüşme sendromunun %50'ye kadarında bulunur . Kan serumunda antikor bulunan bireylerin yaklaşık %80'i bu bozukluğa sahip olacaktır. Antikorların varlığı, PM/SSc örtüşme sendromunun sınırlı kutanöz tutulumu ile bağlantılıdır. Antikorların antijenik hedef bileşenleri olan RNA -işleme eksozom kompleks içinde nucleolus . Bu komplekste on protein vardır ve bunların sekizine karşı değişen frekanslarda antikor bulunur; PM/Scl-100 (%70–80), PM/Scl-75 (%46–80), hRrp4 (%50), hRrp42 (%21), hRrp46 (%18), hCs14 (%14), hRrp41 ( %10) ve hrrp40 (%7).

Anti-DFS70 antikorları

Anti-DFS70 antikorları, dolaylı immünofloresanda yoğun ince benekli bir model oluşturur ve normallerde ve çeşitli koşullarda bulunur, ancak sistemik bir otoimmün patoloji ile ilişkili değildir. Bu nedenle, ANA pozitif bireylerde bu tür koşulların ekarte edilmesine yardımcı olmak için kullanılabilirler. Önemli sayıda hastaya, büyük ölçüde pozitif ANA'ya dayanarak sistemik lupus eritematozus veya farklılaşmamış bağ dokusu hastalığı teşhisi konur. Tanımlanmış bir otoantikorun saptanamaması durumunda (örneğin anti-ENA antikorları), tanıyı doğrulamak için anti-DFS70 antikorlarının test edilmesi önerilir. Anti-DFS70 antikor testleri, CE işaretli testler olarak mevcuttur. Şimdiye kadar, FDA tarafından onaylanmış bir tahlil mevcut değildir.

ANA testi

Antinükleer antikorlar için bir test yürütmek için kit
Antinükleer antikorların tespiti için immünofloresan aşamaları. HEp-2 hücreleri geçirgen hale getirilir (1) ve ardından bir kişinin kan serumu (2) ile inkübe edilir. Serum antikor içeriyorsa, bunlar HEp-2 hücre çekirdeği içindeki antijenlere bağlanır. Bu antikorlar, bir flüoresan moleküle konjuge edilmiş anti-insan antikorları ile müteakip inkübasyon ile görselleştirilebilir (3).

Kanda ANA'ların varlığı bir tarama testi ile doğrulanabilir. ANA'ların saptanması için birçok test olmasına rağmen, tarama için kullanılan en yaygın testler dolaylı immünofloresan ve enzime bağlı immünosorbent testidir (ELISA). ANA'ların saptanmasının ardından çeşitli alt tipler belirlenir.

Dolaylı immünofloresan

Dolaylı immünofloresan , ANA'lar için en sık kullanılan testlerden biridir. Tipik olarak, HEp-2 hücreleri, insan serumundaki antikorları saptamak için bir substrat olarak kullanılır. Mikroskop slaytları HEp-2 hücreleri ile kaplanır ve serum hücrelerle inkübe edilir. Bahsedilen ve hedeflenen antikorlar mevcutsa hücreler üzerindeki antijenlere bağlanacaklardır ; ANA'lar söz konusu olduğunda, antikorlar çekirdeğe bağlanacaktır. Bunlar , antikorlara bağlanan bir flüoresan etiketli (genellikle FITC veya rhodopsin B) anti-insan antikoru eklenerek görselleştirilebilir . Molekül, mikroskop altında görülebilen belirli bir ışık dalga boyu üzerine parladığında floresan verecektir. İnsan serumunda bulunan antikora ve antijenin hücredeki lokalizasyonuna bağlı olarak, HEp-2 hücrelerinde farklı floresan desenleri görülecektir. Antikor seviyeleri, kan serumu üzerinde seyreltmeler yapılarak analiz edilir. 1:40/1:80 titrede floresan görülürse bir ANA testi pozitif olarak kabul edilir. Düşük pozitifler (≤1:160) sağlıklı bireylerin %20'sine kadar, özellikle yaşlılarda bulunduğundan, daha yüksek titreler klinik olarak daha önemlidir. Sağlıklı popülasyonun sadece yaklaşık %5'i 1:160 veya daha yüksek ANA titrelerine sahiptir.

HEp-2

ANA'ların nükleolar boyama paterni.

1975'e kadar, HEp-2 hücreleri tanıtıldığında, immünofloresan için standart substrat olarak hayvan dokusu kullanıldı. HEp-2 hücreleri şu anda immünofloresan ile ANA tespiti için en yaygın substratlardan biridir.

Başlangıçta bir laringeal karsinom suşu başladı, hücre çizgisi HeLa hücreleri tarafından kontamine oldu ve yer değiştirdi ve şimdi aslında HeLa hücreleri olarak tanımlandı.

Büyük boyutları ve hücre hattındaki yüksek mitoz (hücre bölünmesi) oranı nedeniyle daha önce kullanılan hayvan dokularından üstündürler . Bu, sentromer antikorları gibi mitoza özgü antijenlere karşı antikorların saptanmasını sağlar. Ayrıca , hücrelerin sabitlenmesi için aseton kullanıldığı için anti-Ro antikorlarının tanımlanmasına da izin verir (diğer fiksatifler antijeni yıkayabilir).

HEp-2 hücrelerinde görülen birçok nükleer boyama modeli vardır: homojen, benekli, nükleolar, nükleer membranöz, sentromerik, nükleer nokta ve pleomorfik. Homojen desen, yoğunlaştırılmış kromozomlar ve interfaz kromatin boyandığında görülür . Bu model, anti-dsDNA antikorları , nükleozomal bileşenlere karşı antikorlar ve anti-histon antikorları ile ilişkilidir . İki benekli desen vardır: ince ve kaba. İnce benekli desen, anti-Ro ve anti-La antikorları ile ilişkili olan boyanmamış metafaz kromatin ile ince nükleer boyamaya sahiptir . Kaba boyama modeli, anti-U1-RNP ve anti-Sm antikorlarının neden olduğu kaba granüler nükleer boyamaya sahiptir. Nükleolar boyama modeli, anti-Scl-70, anti-PM-Scl, anti-fibrillarin ve anti-Th/To dahil olmak üzere birçok antikorla ilişkilidir. Nükleer membran boyanması, hücre çekirdeğinin etrafında floresan bir halka olarak görünür ve anti-gp210 ve anti-p62 antikorları tarafından üretilir. Sentromer deseni , hücredeki kromozom sayısına karşılık gelen, interfaz ve mitotik hücrelerde birden fazla nükleer nokta gösterir . Nükleer nokta desenleri, interfaz hücrelerinde 13 ila 25 nükleer nokta gösterir ve anti- sp100 antikorları tarafından üretilir . Pleomorfik patern, çoğalan hücre nükleer antijenine karşı antikorlardan kaynaklanır . Dolaylı immünofloresansın, HEp-2 hücrelerinden ANA tespitinde ELISA'ya kıyasla biraz daha üstün olduğu gösterilmiştir.

Crithidia luciliae

C. luciliae substratı üzerinde anti-dsDNA antikorlarının immünofloresan boyama modeli . Flagellum yakınında bulunan kinetoplast lekelidir, bu da sistemik lupus eritamatozusu olan bir kişide anti-dsDNA antikorlarının varlığını gösterir.

Crithidia luciliae , hemoflaggelat tek hücreli protistlerdir . Anti-dsDNA antikorlarının tespiti için immünofloresanda bir substrat olarak kullanılırlar. Birbirine kenetlenen dairesel dsDNA molekülleri ağına sahipbüyük bir mitokondri olan kinetoplast olarak bilinenbir organele sahiptirler. Anti-dsDNA antikorları ve floresan etiketli anti-insan antikorları içeren serum ile inkübasyondan sonra, kinetoplast floresan verecektir. Bu organelde başka nükleer antijenlerin olmaması, C.luciliae'nin substrat olarakkullanılmasınınanti-dsDNA antikorlarının spesifik tespitine izin verdiği anlamına gelir.

ELISA

Enzim bağlantılı immünosorbent tahlili (ELISA) , ANA'ların tespiti için antijen kaplı mikrotitre plakaları kullanır . Bir mikrotitre plakasının her kuyusu, sırasıyla spesifik antikorları saptamak veya ANA'ları taramak için tek bir antijen veya çoklu antijenlerle kaplanır. Antijenler ya hücre özlerinden ya da rekombinanttandır. Kan serumu, plakanın oyuklarında inkübe edilir ve yıkanır. Antijene bağlanan antikorlar varsa, yıkamadan sonra kalırlar. Yaban turpu peroksidazı gibi bir enzime konjuge edilmiş ikincil bir anti-insan antikoru eklenir. Enzim reaksiyonu, antijene bağlanan antikor miktarıyla orantılı olarak çözeltinin renginde bir değişiklik üretecektir. ANA'nın immünofloresan ve farklı ELISA kitleri ile saptanmasında önemli farklılıklar vardır ve bunlar arasında yalnızca marjinal bir uyum vardır. Bir klinisyen, çeşitli tahlillerin sonuçlarını değerlendirmek için farklılıklara aşina olmalıdır.

Duyarlılık

Aşağıdaki tablo, farklı hastalıklar için farklı ANA türlerinin duyarlılığını listeler .

ANA tipi hedef antijen Duyarlılık (%)
SLE İlaç kaynaklı LE Diffüz sistemik skleroz Sınırlı sistemik skleroderma Sjögren sendromu inflamatuar miyopati MCTD
Tüm ANA'lar
(dolaylı IF ile )
Çeşitli 95 100 80 80 70 40-60 95
Anti-dsDNA DNA 60 - - - 30 - -
Anti-Sm snRNP'lerin çekirdek proteinleri 40 - - - - - -
anti-histon Histonlar 60 90 - - - - -
Anti Scl-70 Tip I topoizomeraz - - 20 10 - - -
anti-sentromer sentromerik proteinler - - 30 80 - - -
SS-A (Ro) RNP'ler 40 - - - 50 10 -
SS-B (La) RNP'ler 10-15 - - - 60–90 -
– = %5'ten az hassasiyet

Bazı ANA'lar çeşitli hastalık türlerinde ortaya çıkar ve bu da testin daha düşük özgüllüğüne neden olur . Örneğin, IgM- romatoid faktörünün (IgM-RF) ANA ile çapraz reaksiyona girerek yanlış pozitif immünofloresan verdiği gösterilmiştir . Otoimmün tiroid hastalığı olan hastalarda pozitif ANA ve anti-DNA antikorları bildirilmiştir . ANA, otoimmün tiroid rahatsızlıkları veya romatoid artriti olan kişilerin %45'ine kadar ve HIV veya hepatit C'si olan kişilerin %15'ine kadarında pozitif test sonucuna sahip olabilir . Gereğince Amerika Lupus Vakfı , "genel nüfusun yaklaşık 5% olumlu ANA sahip olacaktır. Bununla birlikte, lupus. Pozitif ANA testi yok pozitif ANA kişilerin en az% 95, bazen ailelerde çalışabilir, aile üyelerinde lupus kanıtı olmasa bile." Öte yandan, gerçekte lupus testi olan hastaların %95'inin ANA için pozitif olmasına rağmen, "Yalnızca küçük bir yüzde ANA negatiftir ve bunların çoğunda başka antikorlar vardır ( anti-fosfolipid antikorları , anti- Ro, anti-SSA) veya ANA'ları steroidlerden , sitotoksik ilaçlardan veya üremiden (böbrek yetmezliği) pozitiften negatife dönüştü ."

Tarih

LE hücresi

LE hücresi içinde keşfedildi kemik iliği Hargraves tarafından 1948 yılında arkadaşları. 1957'de Holborow ve ark. ilk olarak dolaylı immünofloresan kullanarak ANA gösterdi. Bu, hücre çekirdeğini etkileyen süreçlerin SLE'den sorumlu olduğunun ilk göstergesiydi. 1959'da, SLE'li bireylerden alınan serumun, özütlenebilir nükleer antijenler (ENA) olarak bilinen, çekirdeklerin tuzlu özütleri ile çökeltilen antikorlar içerdiği keşfedildi . Bu, ENA antijenlerinin ve bunların ilgili antikorlarının karakterizasyonuna yol açtı. Böylece, sırasıyla 1966 ve 1971'de anti-Sm ve anti-RNP antikorları keşfedildi. 1970'lerde, anti-Ro/anti-SS-A ve anti-La/anti-SS-B antikorları keşfedildi. Scl-70 antikorunun 1979'da sklerodermaya spesifik bir antikor olduğu biliniyordu, ancak antijen (topoizomeraz-I) 1986'ya kadar karakterize edilmedi. Jo-1 antijeni ve antikoru 1980'de karakterize edildi.

Ayrıca bakınız

Referanslar

Dış bağlantılar